Das Violett der Wiwa
Moderator: Moderatoren
Re: Das Violett der Wiwa
Ich nehme mal an, du hast auch die Artikel von Marshall und Horobin (1972 und 1974) gefunden, die 1N Hcl verwendet haben. Das hat bei mir auch nicht funktioniert. Ich glaube, die haben andere Platten/Folien benutzt als die heute allgemein üblichen, mit Kieselgel G60 beschichteten. In einer anderen Arbeit war von Ethanol 80 % die Rede, was bei mir auch nicht geklappt hat.
Das oben genannte Laufmittel, habe ich durch Ausprobieren ermittelt: Ethylacetat/Ameisensäure/Wasser = 10/0,5/0,5. Es ist dem von mgritsch verwendeten zur Trennung der Anthocyanidine sehr ähnlich. Damit klappt die Trennung von Hämatoxylin und Hämateín gut (meine Rf-Werte: 0,64 bzw 0,52 bei - evtl. unvollständiger - Kammersättigung).
Was hast du vor? Hämalaunlösungen chromatographieren?
Das oben genannte Laufmittel, habe ich durch Ausprobieren ermittelt: Ethylacetat/Ameisensäure/Wasser = 10/0,5/0,5. Es ist dem von mgritsch verwendeten zur Trennung der Anthocyanidine sehr ähnlich. Damit klappt die Trennung von Hämatoxylin und Hämateín gut (meine Rf-Werte: 0,64 bzw 0,52 bei - evtl. unvollständiger - Kammersättigung).
Was hast du vor? Hämalaunlösungen chromatographieren?
"Alles sollte so einfach wie möglich gemacht werden. Aber nicht einfacher." (A. Einstein 1871 - 1955)
"Wer nur Chemie versteht, versteht auch die nicht recht!" (G.C. Lichtenberg, 1742 - 1799)
"Die gefährlichste Weltanschauung ist die Weltanschauung der Leute, die die Welt nie gesehen haben." (Alexander v. Humboldt, 1769 - 1859)
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Re: Das Violett der Wiwa
Nein, ich habe eine alte Sammlung histologischer Farbstoffe übernommen, u. a. mit Hämatoxylin, Hämatein und Brasilin und wollte sie auf Reinheit/Verwendbarkeit untersuchen.Was hast du vor? Hämalaunlösungen chromatographieren?
Re: Das Violett der Wiwa
Klasse! Nimm mein Laufmittel. Das funktioniert.
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Re: Das Violett der Wiwa
Update: der fragliche Farbstoff ist auch kein Brasilin! Da Alf mir freundlicherweise eine Referenzprobe zur Verfügung gestellt hat konnte ich einen direkten Vergleich durchführen:
links: Wiwa-Farbstoff - rechts: Brasilin, Folie nach Entwicklung mit ethanolischer KOH besprüht
Weiter habe ich die mir zur Verfügung stehenden Anthrachinonderivate mit dem Farbstoff chromatographiert:
v.l.n.r: Emodin - Wiwa-Farbstoff - Anthrarobin - Chrysarobin, Folie nach Entwicklung mit KOH besprüht
der Wiwa-Farbstoff zeigt mehrere Banden, von denen keine mit dem Brasilin zusammenfällt. Zuoberst findet sich eine ganz schwache gelbe Zone, danach zwei eing aufeinanderfolgende violette Banden und zuletzt bei ziemlich niedrigem RF nochmals eine schwache violette Bande (im ersten Chromatogramm besser zu erkennen). Letztere könnte einem Anthrachinonglykosid entsprechen, der Rf ist ähnlich dem Glykosid Aloin im Eingenagpost.
Das Verhalten des Farbstoffes passt zu einem Anthrachinon - welches es ist kann ich allerdings nicht sagen.
@ Alf: dein Brasilin ist offenbar teilweise zu Brasilein oxidiert, denn es ist kräftig violett gefärbt während in der Wikipedia steht, dass es (wie Hämatoxylin) eine gelbliche farbe haben sollte. Ausserdem ist es überraschend schlecht in Ethanol löslich (ich musste erwärmen).
In der DC sieht man eine Hauptbande und darunter, nach einem verschmierten Beriech, eine zweite, die wohl das Brasilein darstellt (mein Hämatein hat auch einen niedrigeren Rf als das Hämatoxylin). Ich habe auch einen direkten Vergleich mit Hämatoxylin gemacht, bei dem die Spots so blass waren, dass man sie kaum sah (kein Foto). Sie laufen aber deutlich unterhalb des Hämatoxylins.
links: Wiwa-Farbstoff - rechts: Brasilin, Folie nach Entwicklung mit ethanolischer KOH besprüht
Weiter habe ich die mir zur Verfügung stehenden Anthrachinonderivate mit dem Farbstoff chromatographiert:
v.l.n.r: Emodin - Wiwa-Farbstoff - Anthrarobin - Chrysarobin, Folie nach Entwicklung mit KOH besprüht
der Wiwa-Farbstoff zeigt mehrere Banden, von denen keine mit dem Brasilin zusammenfällt. Zuoberst findet sich eine ganz schwache gelbe Zone, danach zwei eing aufeinanderfolgende violette Banden und zuletzt bei ziemlich niedrigem RF nochmals eine schwache violette Bande (im ersten Chromatogramm besser zu erkennen). Letztere könnte einem Anthrachinonglykosid entsprechen, der Rf ist ähnlich dem Glykosid Aloin im Eingenagpost.
Das Verhalten des Farbstoffes passt zu einem Anthrachinon - welches es ist kann ich allerdings nicht sagen.
@ Alf: dein Brasilin ist offenbar teilweise zu Brasilein oxidiert, denn es ist kräftig violett gefärbt während in der Wikipedia steht, dass es (wie Hämatoxylin) eine gelbliche farbe haben sollte. Ausserdem ist es überraschend schlecht in Ethanol löslich (ich musste erwärmen).
In der DC sieht man eine Hauptbande und darunter, nach einem verschmierten Beriech, eine zweite, die wohl das Brasilein darstellt (mein Hämatein hat auch einen niedrigeren Rf als das Hämatoxylin). Ich habe auch einen direkten Vergleich mit Hämatoxylin gemacht, bei dem die Spots so blass waren, dass man sie kaum sah (kein Foto). Sie laufen aber deutlich unterhalb des Hämatoxylins.
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Re: Das Violett der Wiwa
Hallo Lemmi,
habe den Farbstoff auch chromatographiert (mit Ethanol statt Methanol und Eisessig statt Ameisensäure aber in deinem Verhältnis). Ausgewertet habe ich durch Besprühen mit einer 1% Alaunlösung und mit nachfolgendem Bedampfen mit Ammoniak.
zu dick aufgetragen; vlnr.: Hämatoxylin (schwache, pinke Bande darüber ist evtl. Brasilin?) - Hämatein (hauptsächlich Hämatoxylin) - Hämatein (Hämatein und Hämatoxylin Bande) - Brasilin
habe den Farbstoff auch chromatographiert (mit Ethanol statt Methanol und Eisessig statt Ameisensäure aber in deinem Verhältnis). Ausgewertet habe ich durch Besprühen mit einer 1% Alaunlösung und mit nachfolgendem Bedampfen mit Ammoniak.
zu dick aufgetragen; vlnr.: Hämatoxylin (schwache, pinke Bande darüber ist evtl. Brasilin?) - Hämatein (hauptsächlich Hämatoxylin) - Hämatein (Hämatein und Hämatoxylin Bande) - Brasilin
Re: Das Violett der Wiwa
Mein Laufmittel war auf Ethylacetat Basis, wie war deines zusammengesetzt? Und worin hast du das Brasilin gelöst?
Schön scharfe spots in jedem Fall!
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Re: Das Violett der Wiwa
Habe das verwechselt mein Laufmittel war Ethylacetat 10ml - Eisessig 0,5 ml - Wasser 0,5 ml!
Re: Das Violett der Wiwa
Und was hast du als Lösungsmittel für die Farbstoffe verwendet?
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Re: Das Violett der Wiwa
In 50% Ethanol das ich mit einem winzigen Tropfen Eisessig versetzt habe!
Re: Das Violett der Wiwa
Nanu!? Wie kommst du auf Eisessig? Das sind phenolische Substanzen. Die sollten sich besser in alkalischem Milieu lösen.
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Re: Das Violett der Wiwa
Die Essigsäure war nur deshalb dabei weil sich mein Brasilin im Ethanol-Wasser Gemisch schon deutlich rosa gefärbt hat. Wäre egal gewesen da das Laufmittel sowieso Essigsöure enthält.