Auf der Suche nach einer Möglichkeit, geringe Mengen an Plate-Count-Agar herzustellen, bin ich auf die Vorschrift zur Herstellung von Hefeextrakt im DAB 6 gestoßen.
Die Originalvorschrift geht von frischer untergäriger Bierhefe oder Medizinischer Hefe aus; auf pharmawiki.ch habe ich aber auch den Stamm, der in handelsüblicher Trockenbackhefe zu finden ist, als Ausgangsorganismus gefunden.
Hier zum Vergleich die Originalvorschrift aus DAB 6, Nachdruck 1947, in der Fassung der beiden Nachträge:
Extraktum Faecis – Hefeextrakt
Aus Gärbottichen frisch entnommene, untergärige Bierhefe wird in Dekantiergefäßen zunächst bei möglichst niedriger Temperatur mehrmals mit Wasser geschlämmt, hierauf durch Sieb 6 durchgeseiht, sodann mit einer 1 prozentigen Natriumkarbonatlösung entbittert und schließlich wieder so lange mit Wasser ausgewaschen, bis das ablaufende Wasser Lackmuspapier nicht mehr bläut und vollkommen klar und farblos ist. Die so gereinigte, sich rasch absetzende Hefe wird durch langsames Auspressen bei allmählich steigendem Drucke vom anhaftenden Wasser möglichst befreit.
20 Teile dieser Hefe werden mit 10 Teilen Wasser vermischt und nach Zusatz von 1 Teil Salzsäure* bei 40° bis 50° 12 Stunden lang der Selbstverdauung überlassen. Darauf wird die Masse auf dem Wasserbade kurze Zeit erhitzt und der Auszug abgeseiht. Der Rückstand wird noch einmal mit 10 Teilen Wasser auf dem Wasserbad erhitzt und der Auszug abermals abgeseiht. Die vereinigten Auszüge werden filtriert und im luftverdünnten Raume zu einem dünnen Extrakt** eingedampft; dieses wird mit 25 Prozent seines Gewichts medizinischer Hefe, die vorher 2 Stunden lang im Trockenschranke bei etwa 100° erhitzt wurde, vermischt; sodann wird im luftverdünnten Raume zur Trockne eingedampft.
*Nach dem Arzneibuch 25%ig
**Soll die Konsistenz von flüssigem Honig besitzen (Kommentar zum DAB 6, 1. Band, 1926)
Geräte: Bechergläser, Heizplatte, Uhrglas, Saugflasche, Trichter, Filter, Vakuumpumpe
Chemikalien:
Trockenbackhefe (Saccharomyces cerevisiae)
Demin. Wasser
Salzsäure 32%
Hefetrockenextrakt DAB 6
Durchführung:
10,0 g Trockenbackhefe wurden in einem Becherglas abgewogen und mit 10 mL Wasser versetzt. Dann wurden 0,88 g Salzsäure hinzugefügt und das Gemisch für 10 Stunden auf 40-50 °C erwärmt. Anschließend wurde das resultierende dünnflüssige Gemisch für einige Minuten auf der Heizplatte bei ca. 100 °C erhitzt und dann mit der Saugflasche abgesaugt. Der gummiartige Rückstand wurde nochmals mit 10 mL Wasser erhitzt und es wurde erneut abgesaugt.
Die Auszüge wurden vereinigt und filtriert. Das Filtrat wurde im Vakuum bei 120 mbar soweit eingedampft, dass es eine leicht dickflüssige Konsistenz annahm. Es war aber vermutlich noch zu flüssig, denn die weitere Trocknung des Extraktes erschien mir wesentlich schwieriger, als ich es den Angaben im DAB entnommen habe.
Das Flüssigextrakt wurde mit 1,75 g Trockenbackhefe, die vorher 2 Stunden lang im Trockenschrank bei etwa 100° erhitzt wurde, vermischt und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Das erwies sich - wie bereits erwähnt - als erheblich schwieriger, als gedacht, obwohl ich deutlich zuviel Hefe zugegeben hatte! (Es wären nach späterer Berechnung aus der Produktmasse nur 0,34 g notwendig gewesen. Ich habe dummerweise vergessen, den Kolben vorher zu wiegen und konnte so die Masse an Extrakt nur abschätzen.) Die vollständige Trocknung dauerte bei mir im Vakuum (120 mbar) und ca. 80 Grad Celsius Wasserbadtemperatur mehrere Stunden! Es sollte unbedingt eine Gaswaschflasche mit Isopropanol (ggf. kühlen wegen dem Siedepunkt) zwischen Kolben und Pumpenaufbau geschlossen werden! Andernfalls kann es nach ein paar Tagen zu einer unangenehmen Geruchsbelästigung kommen!!!
Das Produkt muss gleich abgefüllt und/oder im Exsikkator aufbewahrt werden! Es ist stark hygroskopisch!
Ausbeute: 3,1 g (Bei korrekter Hefezugabe wären es 1,7 g)
Entsorgung:
Flüssige Abfälle können über den Abfluss, feste Abfälle über den Hausmüll entsorgt werden.
Die Glasgeräte können mit Isopropanol von den Heferückständen befreit werden.
Bilder:
Verwendete Hefe
Hefe bei der Selbstverdauung
(Dabei findet erst eine Hydrolyse der Zellmembranen statt und anschließend eine enzymatische Verdauung)
Rückstand nach dem Absaugen
Filtration der vereinigten Extrakte
Eindampfen im Vakuum
Trockenes Extrakt
Quellen:
Deutsches Arzneibuch, 6. Ausgabe, Neudruck in der Fassung der beiden Nachträge, 1947
Kommentar zum Deutschen Arzneibuch, 6. Ausgabe 1926, 1. Band
http://www.pharmawiki.ch/wiki/index.php?wiki=Hefe
