Der Katalase-Test spielt eine wichtige Rolle in der Mikrobiologie. Er dient als Vordifferenzierung von Mikroorganismen.
Geräte:
- Objektträger 2 Stk. (oder von der Probenanzahl abhängig)
- Impföse
- Labor- bzw. Spiritusbrenner
- wasserfester Stift
Chemikalien:
- Agarkultur 24h
- Agarkultur Katalase-positiv
(z.B. Staphylokokken)
- Agarkultur Katalase-negativ
(z.B. Enterokokken bzw. Streptokokken)
- Wasserstoffperoxid 3%
Hinweise:
Da in diesem Versuch mit Mikroorganismen gearbeitet wird sind die allgemeinen Sicherheitsmaßnahmen beim Umgang mit Mikroorganismen genau zu befolgen.
Es ist auf peinlichste Sauberkeit zu achten. Alle Geräte sind vor und nach der Verwendung gründlich zu desinfizieren. Da in diesem Versuch mit anspruchsvollen
und pathogenen Mikroorganismen gearbeitet wird sollte auf eventuelle Ersatzstämme ausgewichen werden. Dieser Versuch setzt einige Erfahrung voraus und sollte
gründlich geplant werden.
Schutzmaßnahmen:
- Laborkittel (lange Ärmel)
- Einweghandschuhe
- Mundschutz (FFP2 bzw. FFP3)
Durchführung:
Vor Arbeitsbeginn werden alle Arbeitsmittel sorgfältig gereinigt und bereitgelegt. Mit der gut ausglühten und abgekühlten Impföse wird etwas Bakterienmasse (Zellmaterial) von einer 24 stündigen Agarkultur
auf einen beschrifteten Objektträger gegeben und anschließend mit einem Tropfen 3%iges Wasserstoffperoxid benetzt. Dies gilt auch für die Positiv- und Negativkontrolle.
Nach der Durchführung werden die benutzten Objektträger in einer Desifektionslöung eingeweicht und anschließend für die nächsten Bestimmungen gereinigt.
Auswertung:
Nach der Zugabe kann je nach Bakterien-Stamm eine Blasen- bzw. Schaumbildung beobachtet werden.
Wird eine Blasen- bzw. Schaumbildung sofort nach Zugabe des H2O2 beobachtet, so kann der Nachweis als Katalase-positiv angesehen werden.
Ist keine Blasen- bzw. Schaumbildung erkennbar, so wird der Test als Katalase-negativ gewertet. Bei einem verzögerten eintreten der Reaktion,
wird der Test ebenfalls als Katalase-negativ gewertet.
Erklärung:
Das in den Katalase-positiven Bakterien enthaltene Enzym Katalase bewirkt eine Spaltung des Wasserstoffperoxid`s. Das Enzym Katalase hat eine wichtige Schutzfunktion gegen das zytotoxische Wasserstoffperoxid und kommt daher
in allen aeroben Bakterien vor.
2 H2O2 -Katalase-> 2 H2O + O2
Bilder:
-positiver Katalase-Test
folgen demnächst
Du könntest vielleicht noch etwas darauf eingehen warum bei einer verspäteten oder nur schwach einsetzenden Reaktion eine Katalasenegativität gegeben ist. Gibt ja nicht nur