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Re: Isolation menschlicher DNA
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Cyanwasserstoff hat Folgendes geschrieben:
Die Natronlauge löst die Zellwände der Haare auf, sodass die DNA freiliegt.

Haben Haare richtige Zellwände?
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OK, Zellwände mag da falsche Wort sein. Sämtliche Proteine werden aufgelöst. Ich ändere das aber nicht, ich habe sowieso vor, diese Anleitung durch eine viel bessere zu ersetzen.

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Danke das hat mich verunsichert. Ich werde es heute oder morgen auch machen, muss aber wohl Fleischweichmacher anstatt reinem Papain verwenden.
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Warte doch noch etwas, bis ich die andere Anleitung reingestellt habe, dann erhältst du nicht-mutierte DNA. Mr. Green

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Mutiert? Mr. Green Hab ich was verpasst?

War euer Fleischweichmacher auch von orangebrauner Farbe?
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Glaubst du etwa die DNA ist sonderlich froh darum, in heißer konzentrierter Natronlauge herumzuschwimmen?

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Nee das natürlich nicht. Ich dachte es wäre vielleicht in der Diskussion vorher um das gegangen.
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Braucht man beim Fleischweichmacher auch 0,5 g oder mehr?
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Cyanwasserstoff hat Folgendes geschrieben:
@ Tim: Eine Spatelspitze reicht.

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Danke. Ich hab es jetzt ausprobiert und es hat funktioniert. Nach zugabe der HCl wurde die obere Phase sofort trüb.
Allerdings ist es sehr wenig, was letztendlich übrig blieb.
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...weil die DNA die Natronlauge nicht mag. Rolling Eyes Letzlich muss dir aber auch klar sein, dass die Menge DNA, die du so isolieren kannst, im Bereich von vllt. einigen hundert Molekülen (!) liegt. Natürlich ist das nicht viel. Du solltest das lieber aus Wangenzellen machen, das ist der beste Weg, intakte DNA zu gewinnen. Für irgendwelche biochemischen oder biotechnologischen Anwendungen wäre die von dir isolierte DNA jedenfalls nicht mehr zu gebrauchen und du kannst strenggenommen auch nicht behaupten, dass dein Produkt deine DNA ist. Wie gesagt, ich werde die verbesserte Anleitung bald einfügen.

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Alles klar dann werde ich die andere Anleitung auch probieren... falls ich die benötigten Stoffe hab. Interessant war es trotzdem. Very Happy
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Die Stoffe sind selbstverständlich die selben, nur dass du weder Natronlauge noch Salzsäure benötigst. Wenn du richtig viel DNA haben willst machst du das dann Stephan-style: Anstatt etwas auf deinen Wangen herumzukauen beißt du dir ein Stück Wange ab und verwendest das. Mr. Green Nach dem Herumkauen oder Abbeißen Mr. Green musst du dann mit 10 ml Wasser, dem du einen Tropfen Spülmittel pro 500 ml Wasser hinzufügst, umspülen, in ein RG ausspucken und dann Protease/Papain/... hinzufügen und mit Propanol überschichten.

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Ich glaub ich lass das mit dem Stephan-Style, aber man kann auch schonender etwas Mundschleimhaut entfernen... Mr. Green
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Die assoziierten Proteine entfernst du mit Phenol ?

mfg

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Isolation menschlicher DNA
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