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Genetische Manipulation von Escherichia coli
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Genetische Manipulation von Escherichia coli

Die genetische Manipulation von Organismen ist zu einer Standardprozedur geworden: inzwischen ist die Erzeugung mancher transgener Organismen schon mit einfachen Mitteln zu bewerkstelligen. Im Folgenden wird Escherichia coli-Bakterien das Leuchtgen einer Meeresqualle eingebaut, welches für GFP kodiert.

Es wird darauf hingewiesen, dass die Herstellung transgener Organismen in Deutschland nur in dafür vorgesehenen und zugelassenen S1- oder S2-Laboratorien, z.B. an Universitäten, erlaubt ist!

Geräte:

Petrischalen mit Agarose-Nährboden (der außerdem L-Arabinose enthalten muss!), Pipetten, Kulturröhrchen, Impföse, Wasserbad, Eisbad, UV-Lampe, Inkubator

Chemikalien:

Calciumchloridlösung 1 M
pGlo-Plasmide (Lösung; von Biorad)
Nährlösung für Escherichia coli
Stamm von Escherichia coli (B)


2-Propanol oder Ethanol (F)


Wasser
Eis

Durchführung:

250 µl Calciumchloridlösung werden in ein leeres Kulturröhrchen gegeben. Man gibt 100 µl Nährlösung hinzu. Mit einer Impföse wird etwas pGlo-Lösung aufgenommen und ebenfalls zur Lösung im Kulturröhrchen hinzugefügt. Mit einer anderen Impföse wird ein E. coli-Stamm aufgenommen und in die Lösung gegeben, woraufhin man verschließt und durch Antippen gründlich vermischt. Nun wird das Röhrchen 10 Minuten lang im Eisbad gekühlt, dann 50 Sekunden lang bei 55°C im Wasserbad erhitzt und anschließend sofort wieder zwei Minuten lang in das Eisbad überführt. Nun werden Petrischalen mit Agarose-Nährboden mit der Lösung ausgestrichen und 1-2 Tage lang im Inkubator bei 37°C warm gehalten. Wird jetzt die Bakterienkultur mit UV-Licht bestrahlt, fluoresziert sie.

Entsorgung:

Die Bakterienkultur wird mit 2-Propanol oder Ethanol unschädlich gemacht und kann dann über das Abwasser entsorgt werden.

Erklärung:

Das pGlo-Plasmid enthält das Leuchtgen einer Meeresqualle sowie ein induzierbares Operon, welches bei Anwesenheit von L-Arabinose die Transkription des eigentlichen Leuchtgens einleitet. Es kann durch einen Vektor (wie z.B. Bakteriophagen), durch eine „gene gun“ oder durch Hitzeschock in ein Bakterium eingebracht werden. Bei diesem Versuch nehmen die Escherichia coli-Bakterien als Folge des Hitzeschocks das Plasmid auf und stellen von dort an dank der Anwesenheit von L-Arabinose im Agarose-Gel ein unter UV-Licht fluoreszierendes Protein, das GFP, her.

Bilder:


Verwendeter (noch nicht manipulierter) Bakterienstamm


Mit transgenem Escherichia coli-Stamm ausgestrichenes Agarosegel


Fluoreszenz

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Sehr schön, folgen auch weitere Ähnliche versuche ? Kann man den Nährboden hierzu auch selbst aus Agar-Agar machen ?

Hab für Illumina noch ein passendes Gefahrensymbol kreiert,...

mfg

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Re: Genetische Manipulation von Escherichia coli
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Cyanwasserstoff hat Folgendes geschrieben:



250 µl Calciumchloridlösung werden in ein leeres Kulturröhrchen gegeben. Man gibt 250 µl Calciumchloridlösung ... hinzu. .


umständlich?fehler?

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MfG
Coffee
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Ohoh...Xato hat noch gehofft, wir bräuchten das nicht.

Nährboden kann man selbst machen...

Ob weitere derartige (Genetik) Versuche in näherer Zukunft kommen, weiß ich aber nicht. Wink

EDIT: @ Coffee: Editiert. Wink

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Habe noch ein Bild eingefügt und verschiebe jetzt.

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Öhm mal ne Frage: Wo bekommt man eigentlich das ganze Zeugs her? Very Happy


Gruß, Langer
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Und was ist das hier eigentlich genau?
mfG C
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Zitat:
Öhm mal ne Frage: Wo bekommt man eigentlich das ganze Zeugs her?

calciumchlorid, propanol --> chemshop
nährboden--> kannst du dir selbst mit Agar-Agar "basteln" (Agar ist aber nicht gerade billig- zumindest in Apos)
den stamm-->kannst bei dir inder schule auf'n Wc suchen oder du kaufst ihn, was nicht einfach sein wird
plasmide --> keine ahnung

mfg

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@Kohlenstoff: Guckst du hier Wink
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Aber Frankies zeichen ist grün Laughing

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das ist künstlerische freiheit,... das Warnzeuchen für radioaktivität war bereits gelb... also dachte ich grün wär' ne abwechslung^^

mfg

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Grün wie...Biologie halt. Wink

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Nichts für ungut, aber ich hab das Symbol ma einheitlich gefärbt und in die Liste mit aufgenommen. Beim einbinden über die Uploadfunktion wird das PDF sonst mies... Wink
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So find ich es persönlich auch besser Very Happy

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sieht gut aus,...noch gefährlicher Smile

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Genetische Manipulation von Escherichia coli
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